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信帆生物主營產(chǎn)品: 質控品，干擾物質，抗體抗原，elisa試劑盒，動物血制品，生化試劑盒等。實驗代做服務：HE染色/特殊染色/技術服務、免疫組化實驗服務、Western blotting實驗服務、RT-PCR實驗技術服務,QPCR(熒光定量PCR）、酶聯(lián)免疫ELISA、生化測試、液相氣相檢測等

產(chǎn)品名稱：）

貨號：XJC5230

規(guī)格：50T

儲存條件：2-8℃

有效期：6個月

產(chǎn)品簡介

非血紅素鐵檢測試劑盒與總鐵測定方法相似，但樣品須經(jīng)酸和熱處理，經(jīng)離心后非血紅素鐵釋放到上清液中，而含血紅素鐵的蛋白則留在沉淀中。其測定原理是動物組織或細胞經(jīng)組織消化液在酸性加熱條件處理后，經(jīng)離心可分離出血紅素鐵和非血紅素鐵，非血紅素鐵再被還原劑還原為二價鐵后與紅菲咯啉生成紅色化合物，在 500~550nm 有強吸收，可通過酶標儀或分光光度計測定。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成

自備材料

1、蒸餾水或 PBS、分光光度計、比色皿、恒溫箱或水浴鍋、三氯乙酸、鹽酸

2、精密天平、離心管、剪刀、震蕩器或搖床、離心機、試管、勻漿器

樣本處理

A.組織樣本處理

1、1.5ml 離心管稱重，稱取 100mg 左右的組織放入已稱重的離心管中，再次稱重，兩次相減得到組織凈重。

2、組織消化液的制備：用10g三氯乙酸直接加入100ml  0.4mol/L 鹽酸溶液，混勻后轉入棕色試劑瓶，室溫避光待用。

 如果沒有0.4mol/L鹽酸溶液，也可以用濃鹽酸。在干凈的燒杯中先加約 60–70 mL 蒸餾水，然后加入 10g三氯乙酸，輕輕搖晃 / 攪拌至完全溶解。用移液管緩慢加入3.3ml 37%濃鹽酸（注意放熱、酸霧）。  加蒸餾水定容到 100 mL，顛倒混勻。轉入棕色試劑瓶，室溫避光保存。

向離心管中加入 1ml 以上組織消化液，65℃消化不少于 20h，期間用震蕩器震蕩 3~5 次，每次不少于10min，確保組織完全消化；消化完成后用組織消化液定容至 1.5ml，10000rpm 離心 5min，將管壁及蓋子上的液體取下，取上清液轉移至新離心管，混合備用。

B.細胞樣品處理

培養(yǎng)細胞經(jīng)消化后計數(shù)（濃度調整為 0.5 ~ 1×10?/ml），加入等體積的蒸餾水或 PBS 勻漿；勻漿液與組織消化液按 1:5 比例混合，90℃消化 30min，確保細胞完全消化；冷卻后 10000rpm 離心 5min，將管壁及蓋子上的液體取下，取上清液轉移至新離心管，備用。

操作步驟（僅供參考）

1、配制鐵顯色工作液

將菲啰啉溶液、TGA 溶液、乙酸鈉溶液按照3:3:5的體積比混合，配制成鐵顯色工作液，該溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

2、配制系列鐵標準液

先將鐵標準儲液 (100μg/ml) 用蒸餾水稀釋至 20μg/ml，再按如下表格梯度稀釋，配制不同濃度的鐵標準液：

3、加樣操作

取無鐵的干凈比色管，設置空白管、標準管、測定管，按如下表格依次加液，避免產(chǎn)生氣泡；若樣品鐵含量過高，可減少樣品用量或適當稀釋后測定，樣品檢測建議設置 2 個平行管，最終結果取平均值。

4、吸光度測定

加液完成后充分混勻，室溫顯色 10min；以空白管 1 調零，用分光光度計在 535nm 波長處，分別測定空白管 2、系列標準管、測定管的吸光度，記為空白、標準、測定。

注意：比色皿使用前用待測液潤洗2-3次，避免交叉；檢測時比色皿透光面需擦拭干凈，避免指紋、污漬影響讀數(shù)；每個樣品/標準管測3次，取平均值。

5.結果計算

以系列鐵標準液的濃度（2、5、10、15、20μg/ml）為橫坐標，對應吸光度為縱坐標，繪制標準曲線并求得回歸方程，將測定管吸光度代入方程，計算樣品消化液中的鐵濃度；也可省略標準梯度，直接采用單標準比色測定，推薦選擇 5μg/ml 或 10μg/ml 的鐵標準液。

注意事項

1、操作所用器械、槍頭、容器、比色皿等，需保證干燥、潔凈，嚴格避免鐵。

2、組織中非血紅素鐵含量差異較小，需對每個組織樣本和離心管單獨稱重，國產(chǎn)離心管重量偏差較大，需重點注意。

3、試劑盒過期驗證：取 10μl 鐵標準儲液 (100μg/ml)，加入 200μl 鐵顯色工作液，若溶液顯深紅色，說明試劑未過期，可繼續(xù)使用。

4、試劑有效性判讀：以空白管 1 為對照調零后，若空白，說明無鐵，試劑可使用；若空白，說明組織消化液存在鐵。

5.組織消化液配制時候，如果用到濃鹽酸，請務必按照規(guī)定小心操作。

6.試劑產(chǎn)品含有酸性溶液及有一定腐蝕性，請在實驗操作中務必穿戴好實驗服，帶好防護面罩和實驗手套等，做好實驗防護，嚴禁直接接觸試劑。試劑開封后，請盡快使用，以免影響后續(xù)實驗結果。

使用安全措施：請務必穿戴好實驗服、防護面罩和實驗手套等，做好實驗防護。

嚴禁直接接觸產(chǎn)品。剩余產(chǎn)品請勿隨意丟棄，

請按照實驗室相關生物和化學廢棄物的處理規(guī)定，進行處理。