在制造治療性的蛋白、疫苗及其他生物制品時，制藥公司必須從細(xì)菌或哺乳動物宿主細(xì)胞中純化出活性的分子。然而，由于這個過程的效率不高，宿主細(xì)胞的雜質(zhì)（包括DNA）經(jīng)常會污染產(chǎn)品。因此，制造商必須確保宿主細(xì)胞殘留DNA（HCD）的水平低于WHO的標(biāo)準(zhǔn)，通常是100 pg/劑量以下。
這就需要質(zhì)量控制。通常，分析人員采用實時定量PCR（qPCR）來測定殘留DNA的水平，這需要純化出宿主細(xì)胞殘留DNA，以去除樣品中的PCR抑制劑。這一步不僅增加時間和成本，也會造成DNA的損失，導(dǎo)致污染水平被低估。
為此，Bio-Rad公司推出了新產(chǎn)品 – ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification。這種預(yù)混液可配合Bio-Rad的微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)使用，直接測定生物制品中的宿主細(xì)胞殘留DNA。
與實時定量PCR技術(shù)相比，使用微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）技術(shù)和預(yù)混液的好處在于可跳過DNA純化的步驟，直接測定宿主細(xì)胞殘留DNA。Why？因為微滴式數(shù)字PCR技術(shù)采用反應(yīng)分液和終點(diǎn)分析，不容易受到PCR抑制的影響。
同時，ddPCR技術(shù)對靶分子的數(shù)量進(jìn)行直接計數(shù)，而不需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此大大簡化了殘留DNA的定量。據(jù)Bio-Rad介紹，每一批的ddPCR Supermix都是在質(zhì)量控制下生物試劑的，確保不含可檢測的大腸桿菌、小鼠、人、酵母和CHO細(xì)胞DNA。
ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification是以2x濃度提供的，包含探針法ddPCR所需的各種組分，不含引物、探針和模板。它采用熱啟動聚合酶，確保酶在分液的過程中失活。
Bio-Rad的QX200微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在兩年前推出。與傳統(tǒng)的定量PCR相比，數(shù)字PCR的度和靈敏度更佳。利用微滴式數(shù)字PCR技術(shù)，研究人員可以檢測稀有突變，測定拷貝數(shù)變異，并對基因表達(dá)進(jìn)行定量。
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