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材料 二甲苯，酒精（100％，95％），EDTA抗原修復工作液（pH8.0，稀釋50倍使用），0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀釋10倍使用）, DAB顯色液（臨用前配制：試劑盒A、B、C各50ul，于1ml水中混勻）。

 方法 

1. 石蠟切片置60℃烘箱中烘烤過夜

2. 二甲苯中脫蠟，梯度酒精入水(無水乙醇，95％酒精)，浸泡于蒸餾水中待用

3. 抗原修復 取500mlEDTA抗原修復工作液于1000ml燒杯中，在小功率電爐上加熱，至似沸微沸（為了防止脫片）。將組織切片緩慢放入燒杯。繼續(xù)加熱，保持液體在微沸狀態(tài)20分鐘。將燒杯移開火源，室溫下自然冷卻后取出切片，蒸餾水洗1次3分鐘，TBS洗2次每次3分鐘。

4. 每張切片加一滴或50ul 3％*溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性。 TBS沖洗3次，每次3min。

5. 除去TBS液，加一滴或50ul 一抗（滅活PLB免疫小鼠所得到的多抗，1：3000稀釋），陰性對照采用普通血清，室溫下孵育2小時，或4℃過夜。

6. TBS洗3次，每次5min，除去TBS液，每張切片加一滴或50ul polymer enhancer（試劑A），室溫下孵育20min，TBS沖洗3次，每次3min。

7. 除去TBS液，每張切片加一滴或50ul 過氧化物酶標記的抗鼠/兔聚合物（試劑B），室溫下孵育30min，TBS洗3次，每次3min。

8. 除去TBS液，每張切片加一滴或50ul 新鮮配制的DAB，顯色3－10min。

9. 自來水沖洗，蘇木素復染10min，水沖洗。0.1%的鹽酸分化，自來水沖洗，TBS返藍。 10. 不需脫水，直接用中性樹脂封片。

 注意事項 1.抗原修復時必須切片始終能浸泡在液體內，一定要等工作液冷卻后才能將切片取出