真菌總RNA快速抽提試劑盒*
概述
真菌菌絲經(jīng)過(guò)液氮研磨后加入裂解液（Buffer Rlysis-F），迅速裂解細(xì)胞。再通過(guò)lv仿抽提、無(wú)水乙醇沉淀等步驟，可獲得高濃度的 RNA。使用本試劑盒可從 30 mg 真菌中提取 3~5 μg 總 RNA，獲得 RNA 的 OD260/OD280 比值一般為 2.0 左右，可直接用于 RT-PCR、Northern Blot、斑點(diǎn)雜交等實(shí)驗(yàn)。
特點(diǎn)
1.操作簡(jiǎn)單，全過(guò)程可在40分鐘內(nèi)完成。
2. RNA純度高，不含DNA和多糖等雜質(zhì)。
3. RNA得率高，完整性好。
標(biāo)準(zhǔn)抽提步驟
1. 取1ml Buffer Rlysis-F 加入1.5 ml RNase-free的離心管中備用。
2. 取50-100 mg新鮮真菌或20 mg干燥的子實(shí)體或菌絲用液氮研磨成粉末，加到上述1.5 ml離心管中，立即震蕩混勻。液氮研磨過(guò)程中要避免樣品融化，使用的研缽與藥匙等工具應(yīng)事先用液氮預(yù)冷。研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻，避免 RNA 降解。樣品轉(zhuǎn)入離心管時(shí)避免帶入液態(tài)氮，因?yàn)橐旱诜忾]的離心管中迅速轉(zhuǎn)變成氣體可能引起離心管的爆裂，請(qǐng)注意安全。如果使用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的真菌樣品，可短暫離心棄掉培養(yǎng)基后再用液氮進(jìn)行研磨。
3. 向裂解樣品中加入200 µl lv仿，充分混勻。12,000 rpm 4°C離心5 min，取上清。
4. 加入1/3 體積無(wú)水乙醇，混勻，室溫放置3 min，12,000 rpm 4°C離心5 min，小心倒掉上清。
離心后，在離心管底部，可能無(wú)肉眼可見(jiàn)的沉淀產(chǎn)生，屬正?，F(xiàn)象，請(qǐng)繼續(xù)以下操作。
5. 用700 µl的75%乙醇（請(qǐng)用DEPC-treated ddH2O配制）洗滌沉淀，12,000 rpm 4°C離心3 min, 小心倒掉上清。
6. 重復(fù)步驟5一次。
7. 室溫倒置10 min，盡可能使離心管中殘留的乙醇*揮發(fā)。加入50 µl的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀，立即使用或-70°C保存。
真菌總RNA快速抽提試劑盒*
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