狂犬N蛋白（NP）標(biāo)記抗體N蛋白是保守性一種蛋白，同時也是誘導(dǎo)特異性B細(xì)胞和Th細(xì)胞反應(yīng)的良好抗原。GP是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體的抗原，能刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫，是狂犬病毒各蛋白中變異較大的一種蛋白，因此G基因是被用來研究狂犬病毒基因工程苗的基因。 鑒于狂犬病毒野毒株和各固定毒株之間變異較大，而N蛋白保守性比較高，因此本研究將我國狂犬病毒獸用疫苗株(Flury LEP株)的N基因用RT-PCR方法進(jìn)行擴(kuò)增、測序，并用原核細(xì)胞進(jìn)行了初步表達(dá)。對G蛋白進(jìn)行克隆、測序，以及與其它毒株進(jìn)行了序列比較。 首先，本研究采用RT-PCR擴(kuò)增了長度為1353bp的N基因和1575bp的G基因，隨后將它們分別克隆至pET-28a(+)載體中，構(gòu)建了重組質(zhì)粒PET-N和PET-G。 其次，對測序的N和G基因利用生物學(xué)軟件，與人用疫苗株、當(dāng)前流行的代表性街毒株及其它固定毒株的同源性進(jìn)行了對比比較，繪制了進(jìn)化樹。結(jié)果表明，我國現(xiàn)在所用的獸用疫苗株(Flury LEP株)N和G的基因序列與GenBank上已發(fā)表的Flury LEP*一致，表明該疫苗株在傳代過程中未發(fā)生變異，且與現(xiàn)在我國流行的RV野毒株基因序列同源性較高。同時，對N和G基因的抗原性和親水性指數(shù)進(jìn)行了計算和比較，發(fā)現(xiàn)N基因各毒株之間差別很小，而G基因各毒株之間差別較大，尤其是主要抗原位點Ⅲ，LEP333位的精安酸被苷氨酸替代是LEP株與街毒株在該抗原位點的主要區(qū)別。 然后將鑒定正確的PET-N轉(zhuǎn)入BL21細(xì)胞，成功表達(dá)NP，并通過實驗確定了表達(dá)時間和IPTG誘導(dǎo)濃度。 對N和G基因進(jìn)行序列分析有助于對當(dāng)前我國使用的獸用疫苗株的免疫保護(hù)性進(jìn)行分析，同時也能為我國RV的流行病學(xué)研究提供參考依據(jù)。

狂犬N蛋白（NP）標(biāo)記抗體

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